Wpływ koinfekcji wirusem GB C na przeżycie wśród pacjentów z zakażeniem wirusem HIV ad 6

Pozornie zakażone komórki jednojądrzaste krwi obwodowej służyły jako kontrole ujemne. Replikacja HIV, wykazana przez wytwarzanie antygenu p24 w supernatancie z hodowli komórkowej, była hamowana o 23,0 procent po trzech dniach w hodowli i 49,4 procent po sześciu dniach w hodowli, gdy GBV-C i HIV były stosowane do infekowania komórek jednocześnie (Rysunek 3). Aby ustalić, czy zahamowanie wystąpiło po zainicjowaniu zakażenia GBV-C po zakażeniu HIV, komórki zakażono HIV i inkubowano przez 24 godziny przed zakażeniem GBV-C. W komórkach tych replikacja HIV była hamowana o 31,6 procent trzy dni po zakażeniu wirusem HIV io 58,1 procent sześć dni po zakażeniu – wartości podobne do stopnia zahamowania obserwowanego w komórkach, które były zakażone jednocześnie HIV i GBV-C. Komórki zakażone GBV-C 24 godziny przed zakażeniem wirusem HIV wykazywały głębsze hamowanie HIV; w tych hodowlach replikacja została prawie całkowicie zatrzymana przez trzy i sześć dni po zakażeniu (zmniejszona o 87,4 procent trzy dni po zakażeniu HIV i 99,0 procent sześć dni po zakażeniu) (Figura 3). Gdy nowe komórki jednojądrzaste krwi obwodowej stymulowane przez fitohemaglutyninę i interleukinę-2 dodano do hodowli sześć dni po infekcji, wykryto replikację wirusa HIV cztery dni później, ilustrując, że GBV-C nie zapobiegał wnikaniu HIV (Figura 3). Te eksperymenty z koinfekcją przeprowadzono w duplikacie w sumie siedem razy z podobnymi wynikami.
Trzy oddzielne fragmenty izolatu GBV-C testowano wobec trzech oddzielnych preparatów HIV, a efekt hamujący był odtwarzalny. Replikację GBV-C udokumentowano przez odkrycie RNA-pozytywnego w supernatantach z hodowli komórkowych za pomocą RT-PCR, oraz przez wykrycie ujemnego i dodatniego sensownego RNA GBV-C w lizatach komórkowych (dane nie pokazane).
Figura 4. Figura 4. Zakażenie GBV-C i ekspresja powierzchniowa receptorów HIV. Pobudzone hodowle komórek jednojądrzastych krwi obwodowej od zdrowych dawców były zakażone pozornie lub zakażone GBV-C, a komórki oceniano za pomocą cytometrii przepływowej natychmiast (0 godz.) I po 4 i 24 godzinach. Ekspresję CD4, CXCR4 i CCR5 pokazano odpowiednio w górnym, środkowym i dolnym panelu. Porównanie z izotypowym przeciwciałem kontrolnym wykazuje specyficzność znakowania powierzchni. Nie było istotnych różnic między zakażonymi pozornie i zakażonymi GBV-C jednojądrzastymi komórkami krwi obwodowej w ekspresji na powierzchni komórki któregokolwiek z tych receptorów HIV. FITC oznacza izotiocyjanian fluoresceiny, fikoerytrynę PE i cykl Cy5hrome.
Aby ustalić, czy infekcja GBV-C zmieniła ekspresję receptorów HIV na powierzchni komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, powodując zmniejszone przywiązanie i wejście HIV, wykorzystaliśmy cytometrię przepływową do pomiaru ekspresji receptora HIV (CD4) i korektorów ( CXCR4 i CCR5) na komórkach zakażonych GBV-C i pozornie zainfekowanych.16,21 Nie było różnic w ekspresji CD4, CXCR4 lub CCR5 między zakażonymi pozornie i zakażonymi GBV-C komórkami zaraz po zakażeniu lub 5 minutach , 20 minut, godzina, 4 godziny lub 24 godziny po infekcji (Figura 4 pokazuje dane dla trzech punktów czasowych)
[patrz też: dobry gastrolog białystok, szczepionka rekombinowana, endometrioza a in vitro ]
[hasła pokrewne: pou u laryngologa, diagnoza genetyczna, krem z kwasem migdałowym ]